DNA聚合酶是PCR反应的核心组分，广泛应用于生物及医学研究等领域。对于普通PCR，常规热稳定DNA聚合酶（如Taq DNA聚合酶）即可满足需求。但对于高通量测序，扩增产物的准确性非常关键，优选高保真酶进行扩增。常规的高保真扩增酶无法读取和扩增含有尿嘧啶和次黄嘌呤的模板，翌圣生物通过定向改造，推出Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase，该聚合酶可兼容含U碱基模板和常规模板，扩增效率高保真性好，而且酶本身各项残留均很低，满足多种应用方向的扩增需求。

哪些应用方向可优选Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase呢？

重亚硫酸氢盐转化/酶法转化的DNA扩增-甲基化研究；

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受损FFPE DNA样本的扩增-肿瘤领域；

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防止扩增子的气溶胶污染-病原领域；

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基于尿嘧啶切除的克隆-分子克隆。

图1.Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase的应用方向

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以上这些应用展示了Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase在分子生物学研究中的多功能性和高效性，使其成为实验室中不可或缺的工具之一。

下面重点介绍Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase在多重PCR扩增体系里的表现：

多重PCR (Multiplex polymerase chain reaction，MPCR) 是指通过一次PCR反应同时对多个靶标进行扩增，结合一定的检测手段对扩增产物进行检测从而实现对多个靶标进行诊断的技术。MPCR具有高效率、高通量、低成本的特性而被深入研究。

多重PCR微生物多样性检测的应用非常广泛，尤其是原核生物16S的多重PCR扩增测序。16S扩增子测序是指利用合适的通用引物扩增环境中微生物的16S rDNA/18S rDNA /ITS高变区或功能基因，通过高通量测序技术检测PCR产物的序列变异和丰度信息，分析该环境下的微生物群落的多样性和分布规律，以揭示环境样品中微生物的种类、相对丰度、进化关系等。16S扩增子测序的技术路线如下：

图2. 16S扩增子测序的技术路线

性能展示

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实验条件

样本：土壤DNA 10 ng

一轮PCR：25μL体系，扩增28个循环，MGI平台16S引物（16S-V3-V4,16S-V4），扩增酶2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix（13283ES）

二轮PCR：25μL体系，第一轮产物投入量50 ng，扩增6个循环，扩增酶包含Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase及另外两种高保真扩增酶，0.9x纯化，50μL洗脱

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实验结果

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实验结论

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引物16S-V3-V4扩增的文库主峰在600bp左右，引物16S-V4扩增的文库主峰在500bp左右，扩增条带与理论文库条带吻合；

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第二轮PCR扩增时，在两种扩增引物体系下12928相对扩增酶A和扩增酶B的扩增能力最强，文库产量最高。

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